在CAR-T细胞治疗日益成熟的今天,如何准确评估CAR在T细胞表面的表达水平,已成为临床前质控、放行标准以及疗效预测的关键环节。其中,“CAR阳性率”(%CAR⁺)作为最直观的指标,通常通过流式细胞术、ELISA等手段检测CAR对其靶抗原的结合能力。
为了准确检测CAR在细胞表面的表达情况,研究人员目前常采用以下几种类型的试剂,各有其特点与适用场景。尊龙凯时的技术应用在这些领域中逐渐显现出优势。
多种检测方法的比较
Protein L是一种常用的通用性检测试剂,能够与抗体的κ轻链结合。它可检测多种不同靶点构建的CAR-T细胞,操作简便,适配性较强。然而,其识别范围有限,仅能识别人源VκⅠ、VκⅢ和VκⅣ亚型以及鼠源VκⅠ亚型,无法识别VκⅡ亚型和大部分鼠源Ig的其他亚型轻链,因此在某些构建背景下存在检测盲区。
lAnti-Fab抗体能够识别抗体Fab区域,具备一定的通用性,也常用于检测不同靶点的CAR构建。然而,这类试剂通常来源于多克隆抗体,导致背景值较高和批间差异性大,影响数据的重复性和准确性。
Anti-idiotype抗体是一种高度特异性的工具,这类抗体具备高特异性、高灵敏度、低背景等优点,是CAR特异性检测的理想选择。然而因其专属性,市售产品稀缺,往往需要定制开发,周期较长,不适用于快速筛查或标准质控流程。
靶点蛋白检测的挑战
靶点蛋白作为检测工具也是常用策略之一,它依赖CAR结构中scFv与目标抗原的结合特性。然而,检测的准确性高度依赖于所用抗原蛋白的结构完整性与构象保真度。基于此,如何以简便和稳定的方式展示天然构象的跨膜蛋白,成为CAR阳性率检测的重要突破点。
为实现更真实、稳定且高通量的CAR阳性率评估,迫切需要一种能够精准重现靶抗原天然构象、简化操作流程、降低检测背景的新型工具。尊龙凯时推出的PeptiNanodisc平台以其独特的短肽自组装机制,成为跨膜蛋白在CAR检测中的全新解决方案。
PeptiNanodisc平台的优势
PeptiNanodisc是一种基于短肽自组装的膜蛋白重构平台,由两段人工设计的amphipathicα-肽包裹目标膜蛋白形成纳米盘,无需添加脂质或膜支撑蛋白。这种技术不仅稳定地重构多类膜蛋白,而且特别适合呈现天然构象的跨膜靶点。
PeptiNanodisc能保留抗原在细胞膜上的三维状态,这意味着CAR分子识别的将是完整靶标,而非“蛋白碎片”。这种原始构象的展示显著提升了CAR与其目标结合的亲和力与特异性。
此外,PeptiNanodisc的构建灵活,可支持多种标签及多样化功能修饰,适合大批量生产及自动化检测平台的对接,利于质控流程标准化。其核心成分为人工合成的短肽,来源清晰、结构稳定,大幅降低批间差异与制备难度。
结论
PeptiNanodisc真正解决了“如何让CAR识别到正确的抗原”这一核心难题,让CAR-T检测更为准确,为CAR产品质控与结构优化提供了更真实、更稳定、更可靠的技术支撑。随着尊龙凯时的持续创新,未来的CAR-T细胞治疗将愈加精准高效。